快速細胞分析儀應用簡介

發布時間： 2010/7/6　　點擊次數： 1621次

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詳細介紹：

細胞計數一直是令大家頭疼的事，傳統的細胞計數不但麻煩，而且還沒有辦法判斷細胞的活率、細胞的體積、細胞的的直徑、細胞的濃度、以及細胞碎片等諸多問題。

傳統的細胞計數方法就是一臺細胞計數器（hemacytometer）和一部顯微鏡，為了得到準確的計數，血細胞計數器必須首先用擦鏡紙*的進行清潔，然后用將要進行計數的細胞填滿血細胞計數器，過程必須十分小心，這樣才能保證細胞稀釋的合適濃度和細胞沒有聚集的現象，接著你得用顯微鏡按照血細胞計數器上的小柵格進行計數，為了準確起見，你不停的計數直到你數了至少100個細胞為止。

目前使用比較常用的方法是：首先取來樣品細胞用臺盼藍染色，然后通過CDC成像，細胞在CDC成像后通過軟件來計算細胞的個數和細胞的活率，但是這種做法卻存在一下缺點：

一是臺盼藍對細胞有毒害作用，對部分已損傷的細胞會致死，活性測量的結果會有所偏差；

二是對于細胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數。

三是檢測結果重復性差

我現在給大家介紹一種新的方法：

把樣品細胞懸浮在（一種等電壓的電解質溶液）中，在通過一根毛細管測量通道時，被頻率為1MHz的電脈沖掃描檢測細胞，由于死細胞的膜是破裂不完整的，胞內的細胞質同膜外的等滲透緩沖液有相同的電導率，因此電脈沖信號能夠穿過膜直接檢測到細胞核的大小，而活細胞擁有完整的細胞膜，電脈沖信號無法透過，測到的是全細胞的體積，每個細胞或團塊經過測量孔時都會產生一個信號，信號次數就是細胞的數目，信號的大小也與細胞的大小呈一定比例，利用兩者體積上的差異，就能夠區分死活細胞

功能：細胞計數、細胞死活判斷、細胞體積檢測、細胞團校正.

包括: 細胞碎片數細胞活率細胞團校正系數

活細胞數 / 活細胞濃度

死細胞數 / 死細胞濃度

總細胞數 / 總細胞濃度

細胞直徑 / 平均直徑

細胞總體積 / 平均體積/典型體積

適用范圍：

包括所有的哺乳動物細胞（包括腫瘤細胞, 血細胞, 原代培養細胞及各種細胞系），藻類，細菌，精子細胞，寄生蟲，浮游生物等.

應用領域：

藥理毒理分析 / 腫瘤研究 / 混合細胞（干細胞）樣本分析；

組織工程 / 發酵監控 / 病毒感染復數（MOI）分析 / 細胞質量控制；

細胞培養條件的優化 / 環境毒理與檢測 / 海洋生物和藻類研究

細菌及顆粒的計數 / 細胞結團情況評估等

胞膜完整性區分法

這與傳統的臺盼藍染色法有著很大程度的不同。傳統的臺盼藍染色有三大缺點和不足：

一是臺盼藍對細胞有毒害作用，對部分已損傷的細胞會致死，活性測量的結果會有所偏差；

二是對于細胞聚集的團塊無法用染色來分辨計數。

三是檢測結果重復性差。

胞膜完整性技術無須使用染色，而是利用細胞膜的完整性來測定。死細胞具有一個可滲透的細胞膜，它允許等滲緩溶液CASYt-on進入。因此，死細胞內的細胞質同胞外的等滲緩沖液具有相同的電導率，可以被電極所忽略，所測得的僅僅是緊密結構的細胞核的體積。而活細胞擁有完整的細胞膜，胞膜完整性技術分析的是全細胞的體積。利用兩者的相對差異即可區分開來。

電子脈沖分析技術

它和傳統的CCD成像技術有很大的不同。CCD成像技術質量不高，而且是從靜態獲取信息，因此有偏差。而電子脈沖分析技術使用的是動態的電子脈沖分析技術從來獲取信息。當懸浮于電解質溶液中的細胞通過一個的測量孔抽提時，在這片低壓區域中被每秒1百萬次頻率的電子脈沖掃描，同時可對每個細胞作大小，重量厚度及時間的分析。這些信號將在一個有512000個通道的多孔徑分析器中分離和積累，zui后*的結果由芯片計算技術即時性的完成

進步與優勢：

1．電子背景信號通過電子脈沖分析域而被過濾。因此，它是在無背景條件下工作的，即使細胞含量小于100個/ml也能被準確的測量。

2．即使在高活性區間80%--100%也能進行*的辨認，而不會出現錯誤的陽性結果。

3．絕大多數染色法都會傷害細胞，引起結果的偏差。*的方法可免除這種結果，得到真實的細胞情況。

4．不必擔心樣品的濃度過高而影響測量。當高濃度超過允許的極限值時，系統會發出警告信息，通過調整測量的毛細管而改變極限值，然后通過稀釋調節濃度而測量。

5．對于棘手的細胞團問題，通過一個細胞團校正器，它的無限制測量范圍，能在多點測量尺度耦合，使得小細胞團和大細胞團體積都可以測得

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